Hi-C是染色質(zhì)構(gòu)象捕獲技術(shù)結(jié)合高通量測(cè)序的一種技術(shù)，實(shí)現(xiàn)了全基因組范圍內(nèi)的染色體片段間的相互作用的捕獲。主要是將空間結(jié)構(gòu)臨近的DNA片段進(jìn)行交聯(lián)，并將交聯(lián)的DNA片段富集，然后進(jìn)行高通量測(cè)序，對(duì)測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，即可揭示染色體片段間的交互信息，闡述染色體三維結(jié)構(gòu)。
作為染色體三維結(jié)構(gòu)與互作研究的利器，Hi-C技術(shù)常常與WGS、WGBS、chip-seq、DNase-seq/ATAC-seq、RNA-seq等技術(shù)聯(lián)合使用，從DNA線性序列、表觀修飾、組蛋白修飾、三維構(gòu)象、轉(zhuǎn)錄調(diào)控等多組學(xué)層面，研究腫瘤/疾病發(fā)生發(fā)展機(jī)制、分化發(fā)育機(jī)制、畸變機(jī)制等。
今天就給大家介紹一篇發(fā)表于NC的Hi-C+WGS+RNA-seq+Chip-seq聯(lián)合研究腫瘤發(fā)生機(jī)制的經(jīng)典文章。
研究背景
由基因組不穩(wěn)定和有絲分裂缺陷引起的非整倍體可能會(huì)導(dǎo)致CNV，進(jìn)而影響癌癥相關(guān)基因的mRNA和蛋白表達(dá)以及下游增殖通路，也可能進(jìn)一步誘導(dǎo)染色體錯(cuò)誤分離和基因組不穩(wěn)定性，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞進(jìn)化。但是非整倍體在癌癥發(fā)生和發(fā)展中的作用仍知之甚少。
基因組的三維構(gòu)象與癌癥基因組的改變之間相互影響，比如A/B compartment轉(zhuǎn)換與基因表達(dá)的變化有關(guān)，易位容易發(fā)生在空間鄰近度較高的區(qū)域的雙鏈斷點(diǎn)熱點(diǎn)。
在這里，作者對(duì)兩個(gè)非整倍體多發(fā)性骨髓瘤（MM）細(xì)胞系進(jìn)行了Hi-C、全基因組測(cè)序（WGS）和RNA測(cè)序，并結(jié)合一些數(shù)據(jù)庫(kù)中的相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行了整合分析，以更好地解析非整倍體癌癥的分子機(jī)制。
研究方法
材料：
兩種代表亞型的骨髓瘤細(xì)胞系——近三倍體RPMI-8226、近二倍體U266
測(cè)序：
Hi-C：400 M reads /樣本（40 kb分辨率）
WGS：600 M reads /樣本（50×）
RNA-seq：20 M reads /樣本（6G）
數(shù)據(jù)庫(kù)數(shù)據(jù)：
U266細(xì)胞系的ChIP-seq 數(shù)據(jù)；
正常淋巴母細(xì)胞樣B細(xì)胞（GM12878）的Hi-C、WGS、RNA-seq、ChIP-seq數(shù)據(jù)；
研究結(jié)果
1、染色體間易位影響基因組三維構(gòu)象
在RPMI-8226中,WGS鑒定出56個(gè)染色體間易位事件,其中四個(gè)也在top?100的Hi-C染色體間互作中，其中包括RPMI-8226的光譜核型(SKY)圖像中檢測(cè)到t(16,22)(q23,q11)的易位，涉及MM相關(guān)基因WWOX和MAF。在U266細(xì)胞中,鑒定到了80個(gè)受易位事件影響的基因,包括癌癥相關(guān)基因TNIK、FBXW7、TRIM2，其中包含一些之前研究未發(fā)現(xiàn)的MM相關(guān)基因。此外距離易位位點(diǎn)1 Mb的基因中，有一半以上是相比于正常B細(xì)胞差異表達(dá)的。MM細(xì)胞系的染色體間整體互作count明顯高于正常B細(xì)胞?？偟膩?lái)說(shuō)，這些結(jié)果表明，癌細(xì)胞基因組三維構(gòu)象受到染色體間易位的影響。
2、CNV斷點(diǎn)與TAD邊界相關(guān)聯(lián)
在RPMI-8226細(xì)胞中，WGS識(shí)別到了596個(gè)CNV斷點(diǎn)，Hi-C識(shí)別到了3457個(gè)TAD邊界，比較發(fā)現(xiàn)CNV斷點(diǎn)常出現(xiàn)在TAD邊界附近。7.5%CNV斷點(diǎn)同時(shí)也是TAD邊界，30.7%CNV斷點(diǎn)位于TAD邊界120kb內(nèi)。CNV斷點(diǎn)與其最近的TAD邊界之間的距離明顯小于位置隨機(jī)斷點(diǎn)。U266細(xì)胞中的結(jié)果與RPMI-8226細(xì)胞中的相似，說(shuō)明MM細(xì)胞CNV斷點(diǎn)與TAD邊界的相關(guān)性。而對(duì)正常B細(xì)胞中骨髓瘤CNV斷點(diǎn)處的平均絕緣分值的分析表明，正常細(xì)胞中TAD邊界也與癌癥CNV斷點(diǎn)有關(guān)。因此正常細(xì)胞中CNV斷點(diǎn)容易發(fā)生在TAD邊界，或者TAD在從正常向腫瘤的轉(zhuǎn)化過(guò)程中對(duì)破壞具有抵抗能力。
3、compartments A/B轉(zhuǎn)換與基因表達(dá)變化
結(jié)合Hi-C、RNA-seq數(shù)據(jù)，作者對(duì)MM細(xì)胞與淋巴母細(xì)胞樣B細(xì)胞系(GM12878)進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)與正常B細(xì)胞相比，大多數(shù)基因組區(qū)域在MM細(xì)胞中保持相同的compartments。共有8%的基因組區(qū)域從正常B細(xì)胞的compartment?A在MM細(xì)胞中轉(zhuǎn)換為compartment?B，并與下調(diào)基因表達(dá)相關(guān)。24%的基因組區(qū)域從compartment?A轉(zhuǎn)換為compartment?B，并與上調(diào)基因表達(dá)相關(guān)。
此外，GM12878、RPMI-8226和U266細(xì)胞中分別識(shí)別出了2756、3457和3342個(gè)TAD，TAD大小中值分別為800?kb、600?kb和640 kb。兩種MM細(xì)胞TAD數(shù)量較B細(xì)胞均增加1.2倍，且MM細(xì)胞TAD長(zhǎng)度較小。作者在3個(gè)樣本中鑒定出1281個(gè)保守TAD（TAD重疊超過(guò)70%），而僅在2個(gè)MM細(xì)胞存在的保守TAD有740個(gè)。
這些結(jié)果表明，MM細(xì)胞的三維基因組結(jié)構(gòu)發(fā)生了重組，并與基因表達(dá)調(diào)控有關(guān)。
4、染色質(zhì)構(gòu)象與MM病理
為了探討B(tài)細(xì)胞與MM細(xì)胞之間三維基因組變化導(dǎo)致的功能性影響，作者對(duì)位于MM細(xì)胞中6%的compartment B to A的基因組區(qū)域中的基因，以及1%的compartment A to B的基因進(jìn)行KEGG通路分析。通路富集分析顯示，這些基因與MM相關(guān)通路密切相關(guān)，包括MAPK信號(hào)通路、N-glycan生物合成、TNF信號(hào)通路、細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體相互作用通路。
在A/B?compartment轉(zhuǎn)換區(qū)域內(nèi)，發(fā)現(xiàn)了一個(gè)位于2q11.2-q12.1上的細(xì)胞因子受體基因簇，這個(gè)區(qū)域在正常B細(xì)胞中屬于compartment A，但在MM細(xì)胞中均為compartment B，并且與基因表達(dá)下調(diào)有關(guān)，包括多個(gè)白介素IL1R1、IL1R2、IL18R1和細(xì)胞因子MAP4K4。這個(gè)位點(diǎn)的基因表達(dá)的變化與TAD結(jié)構(gòu)、表觀遺傳標(biāo)記相關(guān)聯(lián)，但與拷貝數(shù)變化不相關(guān)。TAD邊界與在癌細(xì)胞中發(fā)生變化的IL1R2基因接近，癌細(xì)胞中活躍增強(qiáng)子標(biāo)記H3K27ac 和H3K4me1的信號(hào)減弱。結(jié)合Hi-C數(shù)據(jù)、WGS數(shù)據(jù)和基因表達(dá)數(shù)據(jù)，可以在TAD和基因水平上將MM細(xì)胞中的空間紊亂和基因表達(dá)變化相關(guān)聯(lián)。
小結(jié)
作者通過(guò)Hi-C對(duì)MM的三維基因組進(jìn)行了研究，并聯(lián)合WGS、RNA-seq、Chip-seq分析了三維結(jié)構(gòu)（compartment、TAD）、CNV、易位和基因表達(dá)之間的關(guān)系，從而識(shí)別MM相關(guān)的通路和關(guān)鍵基因。這些發(fā)現(xiàn)拓展了對(duì)MM的發(fā)生機(jī)制以及非整倍體癌癥基因組的空間無(wú)序性的認(rèn)識(shí)，對(duì)MM的臨床治療和藥物開(kāi)發(fā)有一定的啟示。
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