BSA關(guān)聯(lián)定位分析

對于數(shù)量性狀定位的混池，通常建議混池規(guī)模為群體大小的5%-10%。不同的測序策略，混池規(guī)模會有略微的差別，重測序BSA及轉(zhuǎn)錄組BSA最低要求30個以上，SLAF-BSA最低要求50個以上。文獻(xiàn)報道（300樣/池&160樣/池相比）混池規(guī)模越大，定位的效果會越好。

常測序數(shù)據(jù)量越大，標(biāo)記的準(zhǔn)確性會越高，但成本也會越高，綜合考慮，在這里我們給大家提供BSA項目的最低數(shù)據(jù)量。對于SLAF-BSA，通常我們建議子代混池至少達(dá)到每個個體1×的數(shù)據(jù)量，比如混池規(guī)模為30+30，那么每個混池測至少30×；對于重測序BSA，混池規(guī)模在50以下，子代1×的數(shù)據(jù)是可以的，但是像基因組比較大的物種（如玉米），若混池規(guī)模為100+100這樣的情況，每個混池測50×也是沒有問題的。

能做?，F(xiàn)在我們的BSA關(guān)聯(lián)分析是基于SNP，因為SNP在基因組上的密度要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于Indel以及結(jié)構(gòu)變異，這會使我們定位更加精細(xì)。如果某一個性狀是由Indel、結(jié)構(gòu)變異、導(dǎo)入系所引起的，那么它通常是與某些SNP連鎖發(fā)生的，通過SNP我們會找到候選區(qū)域，再在候選區(qū)域內(nèi)尋找這些Indel或結(jié)構(gòu)變異或?qū)胂?，來尋求決定該性狀的Indel或結(jié)構(gòu)變異或?qū)胂怠?/p>

可以，對于沒有親本的混池，我們會采取ED的方法進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析。

有影響。從關(guān)聯(lián)分析的方法上，有親本的BSA我們會有兩種關(guān)聯(lián)分析方法，SNP-Index和ED，最后的定位結(jié)果是兩種方法的交集，無親本的只能用ED的方法進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析。有親本的作用是排除親本非多態(tài)性標(biāo)記對定位的影響，舉例說明一下，有一個標(biāo)記在混池間是有多態(tài)性的，但在親本上是沒有多態(tài)性，如果有親本，我們的定位結(jié)果是不會有這樣的標(biāo)記，但是沒有親本，定位結(jié)果中就會有這樣的標(biāo)記，定位的區(qū)域會變大，假陽性較多。

不可以，兩個不同群體所采用的閾值沒法計算。

推薦至少做兩個親本的重測序，這樣我們會提供定位區(qū)域內(nèi)非同義突變基因的信息，進(jìn)一步縮小候選區(qū)域的范圍，相當(dāng)于在SLAF-BSA的基礎(chǔ)上精細(xì)點，如果老師經(jīng)費允許的話，群體也做重測序效果肯定是更好的，群體的SNP信息要遠(yuǎn)高于SLAF的，定位也會相應(yīng)變精細(xì)點。

沒有參考基因組的話，通過SLAF我們只能關(guān)聯(lián)到一些標(biāo)簽，對于老師后期的數(shù)據(jù)利用并不是特比好，而通過轉(zhuǎn)錄組可以進(jìn)行Uningene的組裝，進(jìn)而通過關(guān)聯(lián)分析獲得候選區(qū)域內(nèi)的Uningene信息并進(jìn)行功能注釋，對于老師后期數(shù)據(jù)利用還是比較好的。

化學(xué)誘變或者是物理誘變引起的點突變；野生型親本重測序+突變型子代混池測序；有參考基因組；任何發(fā)生性狀分離的家系群體。