中文名: 番茄果實成熟過程中環(huán)狀RNA及其靶標基因的識別
英文名: Identification of circular RNAs and their targets during tomato fruit ripening pathway in tomato
雜志：Postharvest Biology and Technology，2018，JCR園藝學1區(qū)
影響因子：3.24

研究目的
CircRNA-seq識別果實成熟過程中的circRNA，并對其基因調控網絡進行生物信息學分析
材料方法
供試番茄品種為‘Ailsa Craig’，以綠熟期和紅熟期的果實作為材料
測序方法及數(shù)據量
百邁客Illumina Hiseq 2000平臺，去核糖體去線性RNA后建庫測序，綠熟期數(shù)據量6Gb，紅熟期數(shù)據量9Gb。

研究結果
① 番茄果實成熟過程中circRNA的鑒定和特征分析
通過circRNA-Seq完成番茄綠熟期和紅熟期果實中circRNA的鑒定和基本特征分析。在兩個樣品中，共檢測到705個表達的circRNA，其中237個僅在綠熟期果實中表達，118個僅在紅熟期果實中表達。在705個circRNA中，有534（75.74%）、147（20.85%）和24（3.40%）個分別起源于外顯子、內含子和基因間隔區(qū)。此外，1號染色體產生的circRNA數(shù)目最多，其次是7號和11號染色體，并且產生的大部分circRNA的長度小于2kb。可變剪切分析識別到136個源于56個獨立的染色體位點的可變反向環(huán)化剪切事件，其中39個源于外顯子區(qū)域，16個源于基因間隔區(qū)，1個源于內含子區(qū)域。

圖1 circRNA基本特征分析

(A)：共表達和特異表達分析；(B)：來源分析；(C)：染色體分布分析；(D)：長度分析；(E)：可變剪切分析。

② 差異表達circRNA注釋和功能富集
在705個檢測到的circRNA中，340個在綠熟期和紅熟期果實中差異表達，其中221個上調表達，119個下調表達。GO分析的結果表明，這些親本基因主要可以富集到3個主要的GO條目中，包括23個生物學過程，13個細胞組分，和12個分子功能。其中，和果實成熟相關的GO條目，包括細胞壁單元組織和生物合成（GO:0071554）、激酶活性（GO:0016301）、磷酸轉移酶活性（GO:0016773）以及信號轉導活性（GO:0004871）等均顯著富集，表明這些circRNA可能參與番茄果實成熟的調控。

圖2 circRNAs表達分析和Gene Ontology（GO）功能注釋

（A）：circRNAs表達模式分析。紅色、藍色和黑色的點分別代表上調、下調和正常表達的circRNAs；
（B）：基于親本基因對circRNAs進行Gene Ontology（GO）功能注釋。以biological process，molecular function和cellular component對GO terms進行大類劃分；
（C）：番茄果實成熟過程中circRNA顯著富集的GO terms.

③circRNA作為miRNA海綿體調控基因轉錄
為了進一步揭示circRNA在果實成熟中的作用，我們對circRNA靶向的miRNA以及miRNA的靶標mRNA進行了預測。結果發(fā)現(xiàn)其中20個circRNA上含有7個miRNA結合位點，同時鑒定出94個miRNA的靶標mRNA。通過對鑒定到的94個靶標mRNA進行GO富集和KEGG分析，總結出circRNA可能通過調節(jié)代謝過程、激素平衡以及光合相關的通路來調控番茄果實成熟。此外，circRNA還可能通過參與轉錄調控，主要是通過調節(jié)包括ERF、SBP、MYB等果實成熟相關的轉錄因子，來調節(jié)番茄果實的成熟。

圖3 差異表達circRNA通過miRNA調控mRNA的網絡預測

圓形、菱形和矩形分別代表circRNAs、miRNAs和mRNAs；紅色和綠色圓環(huán)分別代表上調和下調cicrRNA。

圖4 差異表達circRNAs調控果實成熟的可能機制

參考文獻

Yin J, Liu M, Ma D, et al. Identification of circular RNAs and their targets during tomato fruit ripening. Postharvest Biology and Technology, DOI: 10.1016/j.postharvbio.2018.10.013.( https://authors.elsevier.com/c/1V-~83IS6-Jtxh)

中文名：冷害刺激下番茄中circRNA的作用分析
英文名：Deciphering the roles of circRNAs on chilling injury in tomato
雜志：Biochemical and Biophysical Research Communications，2016
影響因子：2.371

研究背景

circRNA（環(huán)狀RNA）能夠調控miRNA功能和基因轉錄，近期通過高通量測序技術在動植物當中發(fā)現(xiàn)了大量的circRNA。然而，番茄果實中的circRNA研究地還很少。番茄是一種常見的茄科蔬菜，對冷害特別敏感。為了深入理解circRNA在冷害刺激下的作用，這篇文章用高通量測序技術研究了番茄果實中的cricRNA。

實驗設計

實驗材料：綠熟期番茄果實分為兩個組：
對照組置于10℃冰箱72小時；
冷害組置于0℃冰箱72小時；
取中果皮組織液氮速凍，混樣，用于提取RNA；
共2個樣品，無生物學重復。
測序方法：去線性建庫，Illumina HiSeq 2500，PE125。數(shù)據量每個樣品約5G。

技術路線：

研究結果

一.番茄中circRNA的鑒定

1.circRNA數(shù)量統(tǒng)計

2.染色體來源分析發(fā)現(xiàn)，1號染色體產生的circRNA最多。

3.為進一步了解番茄circRNA的功能，文章分析了circRNA靶向基因，共發(fā)現(xiàn)了862個靶向基因，并對這些基因進行了GO分析。表明這些基因參與了多種生理過程，如氧化還原反應、細胞壁降解、脂質過氧化反應、茉莉酸代謝和脫落酸代謝等。

二、circRNA作為miRNA的海綿調控miRNA功能

1、對circRNA的靶向miRNA分析，發(fā)現(xiàn)102個circRNA共能夠靶向24個miRNA。這些靶向的miRNA調控的基因參與了氧化還原反應、細胞壁降解、熱激蛋白等生理過程，說明circRNA能夠作為miRNA的海綿調控miRNA功能。

部分miRNA列表

2、在854個circRNA中，有163個存在明顯表達差異。與對照組相比，冷害組中有138個上調的circRNA，25個下調的circRNA。

文章亮點

1.circRNA靶向基因分析表明circRNA可能通過調節(jié)靶向基因應對冷害刺激；
2.circRNA還可以作為miRNA的吸附海綿調控miRNA的功能；
3.文章還比較了冷害刺激下番茄果實circRNA的表達差異，有163個存在明顯表達差異，說明番茄果實的circRNA受冷害脅迫調節(jié)；